​常用培养基的灭菌（除菌）方式及注意事项

常用培养基的灭菌（除菌）方式及注意事项

01湿热灭菌

湿热灭菌系指将物品置于灭菌设备内利用饱和蒸汽、蒸汽-空气混合物、蒸汽-空气-水混合物、过热水等手段使微生物菌体中的蛋内质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。该法灭菌能力强，为热力灭菌中最有效、应用最广泛的灭菌方法。药品、容器、培养基、无菌衣、胶塞以及其他遇高温和潮湿性能稳定的物品，均可采用湿热灭菌方法灭菌。

湿热灭菌适用于大部分培养基的灭菌。用湿热灭菌方法对培养基灭菌时，加热的温度和时间对微生物死亡和营养成分的破坏均有影响。灭菌时间不宜过长，否则有机物质例如氨基酸、糖类、维生素等营养物质会在高温下分解，失去营养作用，导致培养基变质、变色，琼脂类培养基不凝固等。

湿热灭菌工艺的开发应考虑被灭菌物品的热稳定性、热穿透性、生物负载等因素。对于无菌要求很高的培养基，例如无菌检查用培养基、微生物计数等非选择性培养基的，湿热灭菌通常采用温度-时间参数或者结合F0值（F0值为标准灭菌时间，系灭菌过程赋予被灭菌物品121°C 下的等效灭菌时间）综合考虑，确保物品灭菌后达到符合要求的无菌保障水平。同时也要保证培养基的性能（PH、灵敏度、促生长能力）符合要求。例如FTM、TSB等。

对于比较特殊的培养基，例如：RV沙门增菌液体培养基（孔雀绿的主要用途是抑制大肠菌群等非沙门菌的生长；六水合氯化镁除了提供必需的离子之外，还可以抑制变形杆菌和大肠杆菌的生长），药典规定灭菌温度不能超过115℃，原因是该培养基含有氯化镁。氯化镁纯品为无色单斜结晶，溶于水，100℃时失去2分子结晶水。常温下其水溶液呈中性。在110℃开始失去部分氯化氢而分解，强热转为氧氯化物，当急速加热时约118℃分解。

市面上常见的RV的灭菌参数为115℃，15min或20min，这个程序并不是严格的过度灭杀法，在制定灭菌程序时，应重点考虑培养基的性能。

02加热煮沸

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（VRBGA）和木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（XLD）是鉴定性培养基,具有较强的选择性,对微生物来说具有有特异性,能抑制大部分细菌的生长，所以无需高温高压灭菌，仅需加热使琼脂完全溶解。

注意事项：在制备VRBGA和XLD时，不建议一直处于煮沸状态，开始沸腾时，离开热源，待稍冷却后，继续加热至沸腾，重复3-4次，直至完全溶解，澄清透明无琼脂颗粒。即可以防止培养基暴沸溢出，也可以避免水分大量挥发

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